افزایش تولید آنتی‌بیوتیک کلاولانیک ‏اسید با ایجاد گونه‌های استرپتومایسس کلاولی‌جروس تراریخت واجد ژن claR

  مقدمه : کلاولانیک‏اسید از جمله آنتی‌بیوتیک‌های مهار کننده‌ی β لاکتاماز بوده که توسط استرپتومایسس کلاولی‌جروس تولید‌ می‏شود. کلاولانیک‏اسید در ترکیب با سایر آنتی‌بیوتیک‌های قوی و حساس به β لاکتاماز مورد استفاده بالینی قرار می‏گیرد. ژن‌ CalR از جمله ژن‌هایی بوده که نقش مهمی در تنظیم تولید کلاولانیک‏اسید ایفا نموده و به منظور بیان ژن‌های اواخر مسیر بیوسنتز کلاولانیک‏اسید مورد نیاز است‏‏.   مواد و روش‏‏ها: کانسترک نوترکیب pMTclaR حاوی ژن تنظیمی claR از دانشگاه اصفهان تهیه و به منظور استفاده، از سویه‌ استرپتومایسس لیویدنس با استفاده از روش لیز قلیایی استخراج شد. به منظور انجام ترانسفورماسیون پروتوپلاست از باکتری استرپتومایسس کلاولی‌جروس تهیه و در مرحله‌ بعد با استفاده از پلی‌اتیلن‌‌گلایکول در سویه‌ استرپتومایسس کلاولی‌جروس ترانسفورم شد. با استفاده از استخراج پلاسمید و انجام PCR ترانسفورماسیون تأیید شد. در نهایت به منظور بررسی نحوه‌ تأثیر ژن claR اضافه شده از روش بایواسی استفاده شد.   نتایج: کلونی‏‌های گچی حاصل از رشد استرپتومایسس کلاولی‌جروس ترانسفورم شده بر روی محیط GYME حاوی آنتی‌بیوتیک مشاهده شد که تأیید انجام ترانسفورماسیون است. از سویه‌ ترانسفورم شده پلاسمید استخراج و ساختار آن توسط ژل الکتروفورز تأیید شد. با استفاده از پلاسمید استخراج شده و پرایمرهای اختصاصی claR واکنش PCR انجام و باند 1334 جفت‌بازی مشاهده شد. در نهایت با انجام روش بایواسی و مشاهده‌ی هاله‌ عدم رشد در نمونه‌ ترانسفورم شده و مقایسه‌ آن با نمونه‌ کنترل مشخص شد که حضور پلاسمید نوترکیب سبب افزایش 3/3 برابری تولید کلاولانیک‏اسید در سویه‌ استرپتومایسس کلاولی‌جروس شده است.   بحث و نتیجه‏گیری: در مطالعه‌ حاضر، با انتقال پلاسمید نوترکیب حاوی ژن claR میزان تولید آنتی‌بیوتیک کلاولانیک‏اسید تا 5/2 برابر افزایش یافت. با توجه به اهمیت دارویی کلاولانیک‏اسید ایجاد سویه‌هایی که توانایی تولید بیشتر کلاولانیک‏اسید را داشته باشند می‌توانند به بومی‌سازی تولید آنتی‌بیوتیک کلاولانیک‏اسید با صرفه‌ اقتصادی بیشتر درمقیاس صنعتی کمک شایانی نماید.